緩沖液準(zhǔn)備
1.沖洗緩沖液(0.1M磷酸鈉,pH7.2)。要避免緩沖液中含NaCl。配好的緩沖液放置于4℃保存。
2.洗脫緩沖液(0.1M磷酸鈉,0.1M氟化鈉,pH7.2)。使用注射器時(shí),洗脫緩沖液需保存在4℃。
3.清洗緩沖液(0.1M磷酸)。
4.保存緩沖液(0.02%疊n化鈉,0.1M磷酸鈉,pH7.2)。
1.從柱子端部拿掉塞子,保存好這些塞子,備用。
2.用10倍柱體積沖洗緩沖液平衡柱子。因?yàn)楸4婢彌_液中含有0.02%的疊n化鈉用來抑菌,為了去除疊n化物對(duì)離子的激發(fā)作用,這步預(yù)平衡是必須的。使針筒充滿沖洗緩沖液,插入柱子并把所有緩沖液推入柱子。
3.預(yù)冷(4℃)的細(xì)胞裂解液上柱。使針筒充滿裂解液,插入柱子并把所有裂解液推入柱子。對(duì)于1ml柱子,可以上5ml的裂解液。
4.用15倍柱體積沖洗緩沖液沖洗柱子。使沖洗緩沖液充滿針筒,插入柱子并把所有的緩沖液推入柱子。這步可以根據(jù)純化蛋白的需要增加額外的沖洗步驟。
洗脫
1.使針筒充滿6倍柱體積的洗脫緩沖液,先把1.5倍柱體積的洗脫緩沖液上柱。收集1.5倍柱體積的流出液,每部分0.5倍柱體積,對(duì)其進(jìn)行分析。在第二部分收集液中通常會(huì)含有一些純化的蛋白。針筒也可以留在柱子上,用塞子塞住出口。
2.在室溫下,用洗脫緩沖液孵育柱子至少30分鐘。如果在4℃下孵育,則至少孵育12小時(shí)。
3倍柱體積洗脫緩沖液上柱。通常大量的蛋白會(huì)在前面五部分洗脫緩沖液中被洗脫出來。
清洗
1.用至少5倍柱體積的沖洗緩沖液沖洗柱子。
2.用3倍柱體積的清洗緩沖液清洗柱子。
3.用5倍柱體積沖洗緩沖液平衡柱子。
4.用2倍柱體積保存緩沖液平衡柱子;蓋好柱子并保存于4℃。
以上便是今天關(guān)于蛋白層析柱使用操作快速指南主要包括四個(gè)部分的全部分享了,希望對(duì)大家今后使用本設(shè)備能有幫助。